本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷！
大鼠胰脂肪酶(PL)酶聯免疫分析試劑盒說明書
本試劑盒用于測定大鼠心機勻漿液及相關液體樣本中胰脂肪酶(PL)含量。使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑組分！如有疑問，請及時。
| 試劑盒組成： | |||
| 中文名稱 | English name | 96T/48T 含量 | 保存 |
| ELISA酶標板(可拆卸） | Microelisa stripplate | 8×12 / 8×6 * | 2-8℃ |
| 標準品(400ng/L) | Standard | 1瓶 0.5ml * | 2-8℃ |
| 標準品稀釋液 | Standard diluent | 1 瓶 1.5ml * | 2-8℃ |
| 酶標試劑 | HRP-Conjugate reagent | 1 瓶 6 ml/3ml * | 2-8℃ |
| 樣品稀釋液 | Sample diluent | 1 瓶 6 ml/3ml * | 2-8℃ |
| 顯色劑 A 液 | Chromogen Solution A | 1 瓶 6 ml/3ml * | 2-8℃ |
| 顯色劑 B 液 | Chromogen Solution B | 1 瓶 6 ml/3ml * | 2-8℃ |
| 終止液 | Stop Solution | 1 瓶 6 ml/3ml * | 2-8℃ |
| 濃縮洗滌液 | wash solution | 1 瓶20ml * | 2-8℃ |
| 說明書 | Instruction | 1份 * | 2-8℃ |
| 封板膜 | Closure plate membrane | 2 片 * | 2-8℃ |
| 密封袋 | Sealed bags | 1個 * | 2-8℃ |
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠胰脂肪酶(PL)水平。用純化的大鼠胰脂肪酶(PL)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入絲裂原激活的胰脂肪酶
洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰脂肪酶(PL)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中大鼠胰脂肪酶(PL)濃度。
標本要求
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成應再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。
5. 培養細胞:檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
6. 組織標本:切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
7. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
8.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
試驗所需自備物品:
1. 酶標儀(450nm波長濾光片)
2. 高精度移液器，EP管及一次性吸頭
3. 37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水
4. 吸水紙
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
200ng/L
5號標準品
150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
100ng/L
4號標準品
150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
50ng/L
3號標準品
150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
25ng/L
2號標準品
150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
12.5ng/L
1號標準品
150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍（48T 的20 倍）濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
8. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
注意事項:
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
實驗目的、靈敏度、檢測范圍和重復性:
●實驗目的：測定大鼠心機勻漿液樣本中胰脂肪酶(PL)含量。
●靈敏度：zui小可測 3.6ng/L。
●檢測范圍 6ng/L - 220ng/L。
●重復性：板內，板間變異系數均<10%。
