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小鼠疊氮胸苷(AZT)ELISA試劑盒檢測說明書
【信息說明】
中文名：小鼠疊氮胸苷(AZT)ELISA試劑盒
中文別名：小鼠疊氮胸苷(AZT)ELISA Kit
供應商：上海遠慕
包裝規格：液體盒裝 96T/48T
保存：2~8℃
有效期：6個月
試劑盒成分：酶標板，試劑，標準品等。
ELISA試劑盒檢測范圍：人、綿羊、小鼠、大鼠、豬、兔、山羊、牛、馬、豬、其它動物細胞因子、植物細胞因子、骨代謝、細胞凋亡、激素內分泌、活性多肽、肝纖維化、自身抗體、血栓與止血、腫瘤、自身抗體科研Elisa檢測試劑盒。
主要用于科研方面，不用于臨床診斷。可以用于檢測各種指標。
【檢測方法】
1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。
3、加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
【技術原理】
1、抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。
2、結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。
3、酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。
4、受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。
5、此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。
6、加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平)，并且重復性好。以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。
5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
【樣本要求】
1、血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
2、血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3、尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4、細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5、組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6、標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
【操作步驟】
1、編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)。
2、加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4、配液：將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用。
5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7、顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘。
8、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。
9、測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
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