細胞增殖（Cell proliferation）是細胞生命活動的重要特征之一。細胞增殖直觀的表現(xiàn)是細胞分裂（cell division）,即由原來的一個親代細胞（mother cell）變?yōu)閮蓚€子代細胞（daughter cell），使細胞的數(shù)量增加。各種細胞在分裂之前，還必須經(jīng)過一定的物質(zhì)準備。物質(zhì)準備和細胞分裂是一個高度受控的相互連續(xù)的過程。這一相互連續(xù)的過程即為細胞增殖。新形成的子代細胞再經(jīng)過物質(zhì)準備和細胞分裂，又會產(chǎn)生下一代的子細胞。這樣周而復(fù)始，使細胞的數(shù)量不斷增加。因而，細胞增殖過程也稱為細胞周期（cell cycle）。
目前在人體中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)25種周期蛋白。這些周期蛋白在細胞周期內(nèi)表達的時相有所不同，所執(zhí)行的功能也多種多樣。各種周期蛋白之間有著共同的分子結(jié)構(gòu)特點，它們均含有一段相當保守的氨基酸序列，成為周期蛋白框（cyclin box）,介導(dǎo)周期蛋白與CDK結(jié)合。
圖1：部分周期蛋白分子結(jié)構(gòu)特征
細胞計數(shù)法
圖:2：細胞計數(shù)法
細胞直接計數(shù)法是檢測細胞增殖的方法之一，簡單易操作，也非常*，只是耗費時間長，所需細胞量多。無法區(qū)分增殖細胞和非增殖細胞，但是可在此基礎(chǔ)繪制細胞生長曲線。
MTT法
MTT商品名為噻唑蘭，是淡黃色的底物，可以被活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶（SDH）還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶Formazan并沉積在細胞中。而剛死亡的細胞則不能剪切足夠的MTT。
特定溶劑（如DMSO）能溶解細胞中的Formazan，用酶標儀在570nm測定其光吸收值。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，F(xiàn)ormazan結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比。此法相較于其他方法更加直觀，操作簡單。
CCK-8法
圖3：WST-8檢測原理圖 (EC=electron coupling reagent，即電子耦合試劑)
目前比較常用的還有CCK-8法，CCK-8是一種類似于MTT的化合物，是MTT的升級替代產(chǎn)品。在電子耦合試劑（EC）存在的情況下，活細胞線粒體中的SDH能使外源性WST-8還原為水溶性的橙黃色Formazan溶液，而死細胞無此功能。
BrdU/EdU摻入法
圖4：BrdU法和BeyoClick™ EdU法檢測原理的比較
*的的檢測細胞增殖的方法是直接檢測細胞中DNA的合成。
初廣泛使用的通過檢測DNA合成來檢測細胞增殖的方法是放射性標記核苷摻入法，如氚標記胸腺嘧啶脫氧核苷([3H]thymidine)摻入法。但該方法由于有放射性污染并且很難實現(xiàn)單細胞檢測而受到很大的限制，隨后逐漸被基于抗體檢測的BrdU(bromo-deoxyuridine)法所替代。BrdU（DNA前體胸腺嘧啶的類似物）可代替胸腺嘧啶摻和到DNA合成期（S期），而后利用抗Brdu單克隆抗體，未變性的雙鏈DNA可用PI染色，顯示增殖細胞。同時結(jié)合其它細胞標記物，雙重染色，可判斷增殖細胞的種類，增殖速度，對研究細胞動力學(xué)有重要意義。但是由于BrdU法步驟繁多，且需要使用BrdU抗體，影響因素較多，穩(wěn)定性比較差。EdU(5-ethynyl-2' -deoxyuridine)，中文名為5-乙炔基-2' -脫氧尿苷，是一種新型胸苷(胸腺嘧啶脫氧核苷，thymidine)類似物，EdU可以在DNA合成過程中替代胸苷摻入到新合成的DNA中。
圖5：BeyoClick™ EdU檢測法中的點擊反應(yīng)(Click reaction)原理圖
另一方面，EdU上的乙炔基能與生物素標記的疊氮化物(Biotin labeled azide)通過一價銅離子的催化發(fā)生共價反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，該反應(yīng)非常迅速，被稱作點擊反應(yīng)(Click reaction)。EdU法基于EdU摻入和后續(xù)的點擊反應(yīng)，無需使用抗體、操作便捷、檢測靈敏度高，是一種在BrdU法基礎(chǔ)上升級換代的新方法。
化學(xué)發(fā)光法
圖6：化學(xué)發(fā)光法檢測ATP的原理圖
ATP作為重要的能量分子，是細胞新陳代謝的一個重要指標，也是具有代謝活性細胞的重要標志性分子，并和活細胞數(shù)目成良好的線性關(guān)系。因此，ATP含量能很好地反應(yīng)活細胞的數(shù)目，并且，ATP法簡單、快捷且靈敏，非常適合高通量研究，是許多藥物篩選實驗的首xuan。
該方法大的優(yōu)點在于檢測靈敏度特別高，可以檢測到低至約12個細胞，并且檢測速度非?？?約十分鐘就可完成一個96孔板的檢測)，特別適合用于高通量檢測。CTL和CTL Plus兩者相比，CTL Plus的檢測上限更高，線性范圍更寬，并且發(fā)光值隨時間的穩(wěn)定性也更高一些。經(jīng)費非常充裕時推薦使用CTL Plus，但CTL在96孔板中單孔的細胞數(shù)量不超過3萬時也能滿足常規(guī)的高通量檢測需要。
