支原體是一種大小介于細菌和病毒之間(最小直徑0.2um)并獨立生活的微生物。約有1%可通過濾菌器。支原體無細胞壁形態(tài)呈高度多形性。可為圓形、絲狀或梨形。
 

　　支原體形態(tài)多變，在光境下不易看清內部結構。電鏡下觀察支原體膜為三層結構。其中央有電干密度大的密集顆粒群或絲狀的中心束。支原體多吸附或散在于細胞表面和細胞之間。橫斷面與細胞微絨毛相似，但微絨毛電子密度比支原體小，且中央無顆粒群或中央束。
 

　　支原體代謝需固醇類物質、部分種類需要精氨酸、O 2或葡萄糖，每一種支原體都有自身持點。多數支原體適合于偏堿條件下生存(PH7.6—8.0)，對酸耐受性差。對熱比較敏感，對一般抗生素不敏感。
 

　　支原體污染細胞后。培養(yǎng)液可不發(fā)生混濁。多數情況下細胞病理變化輕微或不顯著，細微變化也可由于傳代、換液而緩解。因此易被忽視。但個別嚴重者，可致細胞增殖緩慢。甚至從培養(yǎng)器皿脫落。
 

　　為確定有無支原體污染可做如下檢酗：
 

　　①相差顯微境檢測：將細胞按種于事先放置于培養(yǎng)瓶內的蓋玻片上，24h后取出，用相差油鏡觀察。支原體呈暗色微小顆粒位于細胞表面和細胞之間。
 

　　②熒光染色法：熒光染色用能與DNA特異性結合的熒光染料Hoechst 33258，可使支原體內含有的DNA著色，染色后用熒光顯微鏡觀察。具體方法如下：首先將細胞接種蓋玻片上，在細胞未長滿前取出玻片，用不合酚紅的Hanks液漂洗一下，用l： 3醋酸甲酵固定10Min，然后用生理鹽水漂洗。置于用生理鹽水配濃度為50pg/ml的Hoechst 33258中染色10min。染色后用蒸溜水洗1—2min。向細胞面滴加pH5.5磷酸緩沖液數滴，然后置熒光顯微鏡下觀察。鏡下支原體為散在于細胞同圍或附于細胞膜表面的亮綠色小點。
 

　　③電鏡檢查；用掃描電鏡方法簡便快速。也可以利用透射電鏡。
 

　　④DNA分子條文檢查或支原體培養(yǎng)等方法：檢出率高。但方法較為復雜
 

　　支原體是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物，大小一般在0.3-0.5um之間，呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細胞，也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色，用姬姆薩染色很淺，革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細胞培養(yǎng)中生長，營養(yǎng)要求比細菌高。
 

　　細胞培養(yǎng)(特別是傳代細胞)被支原體污染是個世界性問題。在細胞培養(yǎng)中支原體感染發(fā)生率達到63%，支原體感染發(fā)生后能改變細胞的DNA,RNA及蛋白表達，又不能通過可視法對其進行檢測，而且它對細胞的生長率影響較小，不易引起注意。國內外研究表明，95%以上是以下四種支原體：口腔支原體(M.orale)、精氨酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和萊氏無膽甾原體(A.laidlawii)，為牛源性。以上是最常見的污染細胞培養(yǎng)的支原體菌群，但能夠污染細胞的支原體種類是很多的，國外調查證明，大約有二十多種支原體能污染細胞，有的細胞株可以同時污染兩種以上的支原體。
 

　　支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。
 

　　組織細胞培養(yǎng)工作中，主要從以下幾個方面來預防支原體的污染：控制環(huán)境污染；嚴格實驗操作；細胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌；在細胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細胞后，特別是重要的細胞株，有必要清除支原體，常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯(lián)合處理。支原體蕞突出的結構特征是沒有細胞壁，一般來講，對作用于細胞壁生物合成的抗生素，如 -內酰胺類、萬古霉素等*不敏感；對多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體最有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內酯類及一些氟喹諾酮；其他類抗生素如氨基糖苷類、氯霉素對支原體有較小抑制作用，所以常不用來作為支原體感染的化學治療劑。
 

　　對于支原體污染的細胞，可以采取補救措施：
 

　　1、抗生素排除法：可以用5-10倍于常用量的沖擊法，加入高濃度抗生素后作用24-48小時，再換入常規(guī)培養(yǎng)液，有時可能有效。推薦用量：慶大霉素 200ug/ml ,四環(huán)素10ug/ml ，卡那霉素50ug/ml 。對于支原體污染抗生素應用，預防性應用比污染后使用好。
 

　　2、 加溫除菌：根據支原體耐熱性能差的特點。將受支原體污染的細胞置于41度中作用5-10小時可以殺滅支原體。但由于41度對培養(yǎng)細胞本身也有較大的影響，故處理前，應先進行預試驗，確定出最大限度殺傷支原體而對細胞影響較小的處理時間。