剛買來的細(xì)胞，前幾代養(yǎng)著還行，這越養(yǎng)怎么狀態(tài)越差？后面的實(shí)驗(yàn)可怎么辦？經(jīng)常「飼養(yǎng)」細(xì)胞的小伙伴，應(yīng)該都遇到或聽說過上述這些情況。影響細(xì)胞狀態(tài)的潛在因素有很多，血清就是其中之一。
血清對于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的重要性毋庸置疑：提供細(xì)胞生長增殖所需的營養(yǎng)物質(zhì)、提供結(jié)合蛋白、幫助細(xì)胞貼壁、提供蛋白酶抑制劑、調(diào)節(jié)培養(yǎng)體系理化特性等等功能。因此，可以這樣認(rèn)為：血清品質(zhì)的優(yōu)劣，一定程度上決定了細(xì)胞生長狀態(tài)的好壞。
很多從業(yè)者在挑選血清的時(shí)候，只關(guān)注到品牌、產(chǎn)地，甚至?xí)募掖蛘圪I哪家，忽略了血清的檢測指標(biāo)、批次以及解凍儲存情況。那么，這些細(xì)節(jié)究竟有何玄/機(jī)？下面我們將目光鎖定在這三個方面，揭秘其在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，導(dǎo)致血清使用效果出現(xiàn)差異的原因，希望可以給各位從事細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)工作的小伙伴，提供幫助！
一、檢測指標(biāo)
血清對于細(xì)胞培養(yǎng)很重要，要保證血清質(zhì)量，需要有嚴(yán)格的質(zhì)控，包括從外觀到理化性質(zhì)、細(xì)胞增殖試驗(yàn)和微生物檢查，制定一系列的標(biāo)準(zhǔn)，以及出廠產(chǎn)品能符合這些標(biāo)準(zhǔn)。
以胎牛血清為例，優(yōu)質(zhì)的特級胎牛血清，外觀應(yīng)是淡棕色至橙色透明液體，無顆粒物沉淀；PH 在 6.7-8.2 之間；滲透壓在 260-340mosm/kg 之間；血紅蛋白含量小于 20 mg/dL；總蛋白含量在 30-50 g/L；白蛋白含量在 14-34 g/L；α、β、γ 球蛋白含量則以實(shí)際測量為準(zhǔn)；IgG 應(yīng)小于 250 μg/mL；內(nèi)毒素含量應(yīng)小于 10EU/mL。
這些指標(biāo)直接關(guān)系到所培養(yǎng)細(xì)胞質(zhì)量的高低。其中的典型代表就是內(nèi)毒素。健康的胎牛血本身是不含有內(nèi)毒素的，但是由于采集過程，運(yùn)輸環(huán)境，生產(chǎn)工藝等多種因素，商業(yè)化的成品胎牛血清不可避免地會檢出內(nèi)毒素。我們都知道，內(nèi)毒素參與細(xì)胞的衰老、凋亡等進(jìn)程。長期用內(nèi)毒素含量高的血清培養(yǎng)細(xì)胞，更容易影響細(xì)胞正常的生理生化功能，令細(xì)胞不知不覺進(jìn)入「亞健康」的狀態(tài)。細(xì)胞健康，實(shí)驗(yàn)結(jié)果才能更準(zhǔn)確；細(xì)胞「萎靡不振」，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也容易隨之產(chǎn)生偏差。
因此，在挑選血清、查看檢測報(bào)告的時(shí)候，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注內(nèi)毒素這一項(xiàng)，選擇內(nèi)毒素含量低的血清。以 Ausbian 特級胎牛血清為例：經(jīng)過檢測，其內(nèi)毒素含量穩(wěn)定小于 3EU/mL，一些批次甚至小于 1.0 EU/mL！「飲食干凈」，細(xì)胞狀態(tài)更健康！
二、血清批次
每年全球產(chǎn)的胎牛血清的總量是有限的。正常情況下，胎牛血清是通過剖腹產(chǎn) 5-8 月齡的牛胚胎，采用心臟穿刺采血的方式，經(jīng)一系列加工處理后得到的。一次采血最多也就 1 到 2 瓶胎牛血清，所以它本身就要比其他血清更為稀少珍貴。
再大的血清制造商，每一批的血清產(chǎn)量都是有限的。不同飼養(yǎng)條件下、不同品種，相同流水線上操作的不同員工，都會導(dǎo)致同一品牌不同批次的血清略有差別。不同批號的血清在同一個實(shí)驗(yàn)中混用，很難保證細(xì)胞不會因?yàn)椤革嬍场垢淖兌Ｋ?shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不穩(wěn)定這樣的「小脾氣」。
那么，該怎樣解決這一難題？每次換血清都從頭驗(yàn)證？還是和之前的血清混合使用？最行之有效的方法，就挑選一個安全可靠、貨源充足、產(chǎn)品可溯源的品牌！
遠(yuǎn)慕提供Ausbian 特級胎牛血清，近二十年服務(wù)過千萬細(xì)胞培養(yǎng)用戶，澳洲血源，原裝/進(jìn)口，供貨穩(wěn)定，每個批次產(chǎn)量 800-2000 升，保證大多數(shù)項(xiàng)目兩年不需換批次。不僅如此，Ausbian 特級胎牛血清可提供多批次平行供應(yīng)，會根據(jù)用戶的不同需求，挑選符合實(shí)驗(yàn)需求的血清，盡可能減少血清因批次不同而產(chǎn)生的實(shí)驗(yàn)誤差。
三、血清的解凍與儲存
剛到貨的血清應(yīng)該怎樣儲存？血清到底要怎樣解凍才能保證活性？血清在 4℃ 冰箱能放多久？這些細(xì)節(jié)也會影響血清的使用效果。
常規(guī)儲存
首先，剛到貨的血清，趁著它還未融化，趕緊放進(jìn)-20℃ 冰箱中，避免反復(fù)凍融。當(dāng)然，如果你的課題組不差錢，-80℃ 冰箱空間充足，把血清儲存進(jìn)去也是沒有問題的。
再來說說血清的解凍。很多從業(yè)者都習(xí)慣將血清從-20℃/-80℃ 取出后，直接丟在 4℃ 冰箱甚至是室溫環(huán)境下過夜解凍。這種方法雖然看似方便省心，實(shí)則有一定的潛在風(fēng)險(xiǎn)。
科學(xué)解凍
我們都知道，在血清這種混合物中，融化速度：蛋白質(zhì)等干物質(zhì) > 水這類溶劑，所以蛋白質(zhì)會率/先溶解析出，而水還是結(jié)成冰的狀態(tài)，導(dǎo)致瓶子中間會出現(xiàn)一根透明的冰柱，而周圍則會呈現(xiàn)上黃下紅的分層渾濁液的狀態(tài)，在使用過程中很容易引起沉淀、混合不均勻、局部濃度過高等問題，影響細(xì)胞生長。
更重要的一點(diǎn)是，血清中珍貴的生長因子等活性物質(zhì)，它們在解凍過程中，有著與細(xì)胞復(fù)蘇類似的經(jīng)歷，都需要快速解凍才能盡可能保留生物活性。顯然，4℃ 過夜這樣的長時(shí)間處理，很有可能會導(dǎo)致一部分「營養(yǎng)成分」的損失，影響細(xì)胞生長。
所以，為了更好地保留血清中的活性成分，使細(xì)胞培養(yǎng)更穩(wěn)定，我們推薦使用三步法溶解。如果是儲存在-80℃ 的血清，則需提前幾天先轉(zhuǎn)移至-20℃ 冰箱中（至少 24 小時(shí)），再使用三步法溶解，避免溫差過大使血清失活。
需要特別提醒的是，此方法國際通用，適用于所有培養(yǎng)基，在水浴過程中，血清的平面要完/全浸在水中。在融化過程中要慢慢搖動瓶身，使血清混勻，但搖動中盡量不要產(chǎn)生泡沫！
徹/底解凍血清后，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，將其分裝，保證每一份夠一次使用量即可，比如：25 ml/管、50 ml/管等。密封好后趕緊放回-20℃ 冰箱繼續(xù)儲存。需要配制培養(yǎng)基的時(shí)候，再從-20℃ 冰箱中取出一管來解凍使用（最好能全部配成培養(yǎng)基，不要有剩余），可以有效避免反復(fù)凍融的問題（遵循現(xiàn)用現(xiàn)配、現(xiàn)配現(xiàn)解凍的原則）。配好的培養(yǎng)基可以放到 4℃ 冰箱進(jìn)行儲存。
看到這里，問題又來了，配好的培養(yǎng)基，或者剩下的那一點(diǎn)點(diǎn)血清，能在 4℃ 冰箱里放多久呢？先給出我們認(rèn)為比較合理的答案，再來解釋原因：7 天
一般情況下，已經(jīng)解凍的血清，無論是配成完/全培養(yǎng)基還是在冰箱里備用，都不要超過一周（7 天），原因也很簡單，存放太久，生長因子等物質(zhì)容易失活，而且比較容易受到污染，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
其實(shí)，無論是日常使用，還是銷售運(yùn)輸過程中，血清都忌諱反復(fù)凍融，不僅容易析出沉淀，造成細(xì)胞污染的假象，給實(shí)驗(yàn)人員造成比不要的困擾，而且在一些對營養(yǎng)需求比較特殊的細(xì)胞而言，反復(fù)凍融析出大量沉淀的血清，可能不足以供給其營養(yǎng)，導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)生長不良等狀況。
因此，選擇一款運(yùn)輸途中儲存條件有保障的血清，至關(guān)重要。Ausbian 特級胎牛血清及其同系列血清產(chǎn)品，出廠后，全程冷鏈運(yùn)輸，對反復(fù)凍融 Say No！
綜上所述，想要保證細(xì)胞狀態(tài)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定，一款優(yōu)質(zhì)的血清必不/可少。遠(yuǎn)慕可提供各種合適的特級胎牛血清，詳情關(guān)注我們哦！
